以下是針對(duì)尺寸排阻色譜(SEC)色譜柱的專業(yè)清潔方法總結(jié)，涵蓋清洗原理、操作步驟及注意事項(xiàng)：

　　一、SEC色譜柱的污染類型與識(shí)別

　　1. 離子性吸附

　　- 表現(xiàn)：峰形拖尾、保留時(shí)間漂移。

　　- 原因：樹(shù)脂基質(zhì)中羧基帶負(fù)電，與樣品中陽(yáng)離子結(jié)合。

　　2. 疏水性吸附

　　- 表現(xiàn)：壓力升高、峰容量下降。

　　- 原因：苯環(huán)類化合物或疏水性蛋白吸附于填料表面。

　　3. 復(fù)合污染

　　- 特征：同時(shí)存在離子性和疏水性吸附，需聯(lián)合清洗。

　　二、針對(duì)性清洗方法

　　(一)樹(shù)脂基質(zhì)色譜柱

　　1. 離子性污染清洗

　　- 溶劑選擇：1 mol/L醋酸緩沖液(pH 4.0)或含0.5 mol/L NaCl的水溶液。

　　- 操作：以0.5 mL/min流速反向沖洗10–15倍柱體積。

　　2. 疏水性污染清洗

　　- 強(qiáng)效溶劑：PW·PL系列用50%甲醇，α/SuperAW系列用純乙腈。

　　- 注意：逐步提高有機(jī)相比例，避免填料收縮變形[。

　　3. 頑固蛋白殘留

　　- 特殊試劑：6–8 mol/L尿素溶液或0.2% Triton X-100表面活性劑。

　　- 風(fēng)險(xiǎn)提示：清洗后需徹洗，防止試劑殘留影響后續(xù)分析。

　　(二)硅膠基質(zhì)色譜柱

　　1. 堿性物質(zhì)污染

　　- 酸性清洗：0.1%磷酸/乙腈混合液(pH 2.5–3.0)，沖洗5–10倍柱體積。

　　2. 疏水性物質(zhì)污染

　　- 梯度洗脫：從10%甲醇逐步升至30%，避免鹽析現(xiàn)象。

　　三、標(biāo)準(zhǔn)化清洗流程

　　1. 預(yù)處理

　　- 斷開(kāi)檢測(cè)器連接，防止污染物進(jìn)入流通池。

　　- 反接色譜柱(入口→出口方向反轉(zhuǎn))，降低篩板堵塞風(fēng)險(xiǎn)。

　　2. 分段沖洗

　　- 第一階段：純水或緩沖液沖洗10倍柱體積，去除水溶性雜質(zhì)。

　　- 第二階段：根據(jù)污染類型選擇專用清洗劑，流速≤50%最大耐壓值。

　　- 第三階段：純?nèi)軇┲脫Q殘留清洗劑，例如甲醇→水的梯度過(guò)渡。

　　3. 效果驗(yàn)證

　　- 測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)品(如葡聚糖)的峰對(duì)稱性和理論塔板數(shù)。

　　- 空白進(jìn)樣確認(rèn)無(wú)鬼峰，表明污染物已清除。

　　四、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

　　1. 流速控制

　　- 初始沖洗流速≤0.5 mL/min，逐步提升至正常分析流速。

　　2.溶劑兼容性

　　- 避免使用THF等強(qiáng)溶劑長(zhǎng)期浸泡聚甲基丙烯酸酯填料。

　　- pH范圍限制：硅膠基質(zhì)需維持pH 2–8，防止結(jié)構(gòu)溶解。

　　3. 滅菌與長(zhǎng)期保存

　　- 短期存放(<7天)：150 mM磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)。

　　- 長(zhǎng)期封存：含0.05%疊氮化鈉的20%乙醇溶液，抑制微生物生長(zhǎng)。

　　五、預(yù)防性維護(hù)建議

　　1. 進(jìn)樣前過(guò)濾：使用0.22 μm濾膜去除顆粒物。

　　2. 定期再生：每完成100次分析后執(zhí)行基礎(chǔ)清洗程序。

　　3. 壓力監(jiān)控：當(dāng)系統(tǒng)壓力較初始值升高30%時(shí)啟動(dòng)深度清洗。

　　通過(guò)上述系統(tǒng)化維護(hù)策略，可顯著延長(zhǎng)SEC色譜柱使用壽命并保持分離性能穩(wěn)定。